细胞周期

实验介绍

细胞周期 (cell cycle) 是指细胞从上一次分裂完成到下一次分裂结束所经历的全部过程，包括分裂间期和分裂期 (M期)，其中分裂间期又可分为DNA合成前期 (G1期)、DNA合成期 (S期)、DNA合成后期 (G2期)。G0期是静止期细胞，它们暂时脱离细胞周期，停止细胞分裂，但在一定条件的刺激下，又可重新进入细胞周期进行分裂 。

细胞是生命活动的基本单位，而细胞周期又与细胞的增殖和分化密切相关。因此，对于细胞周期的检测至关重要。细胞内的DNA含量会随细胞周期进程而发生周期性变化，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各阶段的百分比。

实验方法

1. 收集细胞并在PBS中洗涤。

2. 在预冷的70%乙醇中固定。

3. 在4℃下固定30 min以上。

4. 用核糖核酸酶处理细胞。加入50 µLRNase存储液 (100 µg/mL)。这可确保仅染色 DNA，而不会染色RNA。

5. 加入200 µL PI（50 µg/mL 的存储液）。

6. 上机检测，分析数据。

实验结果：

示例图

客户提供

1. 细胞及药物

2. 实验方案（处理条件及处理浓度）

结果交付

细胞周期检测结果及实验报告。

实验影响因素

F  染料选择：PI适用于固定细胞，Hoechst 33342可用于活细胞染色，根据实验需求选择。

F  固定方法：70%乙醇固定可长期保存样本，但需注意细胞浓度和固定时间。

F  数据分析：使用专业软件分析数据，注意设置合适的门控，排除碎片和双联体。

F  常见问题：DNA含量异常可能由固定不当或染色不均引起，需优化实验条件。