猪( Sus domesticus,pig ),又称猪(复数:swine) 或猪,是一种杂食性、驯养的、偶蹄类哺乳动物。为了区别于Sus属的其他成员,人们将其命名为家猪。一些权威人士认为它是Sus scrofa (野猪或欧亚野猪)的一个亚种,但另一些人则认为它是一个独立的物种。猪在新石器时代就被驯养,在东亚和近东都有。当家猪到达欧洲时,它们与野猪广泛杂交,但仍保留了家猪的特征。
猪属于偶蹄目、猪形亚目。驯化主要发生在农耕地区,猪在那里以人类剩菜剩饭为食,与人类建立互利共生关系。相比之下,反刍偶蹄动物则是由游牧牧民驯化的。猪形亚目似乎已分化为三个主要科:( a ) 野猪科,包括野猪;( b ) 河马科;( c ) 猪科,由至少 15 个物种组成,包括家猪和野猪、红河猪、疣猪、丛林猪和印度尼西亚的猪鹿
母猪3-12月龄性成熟,若配种失败,每18-24天发情一次。排卵率的变化既有年龄、基因型等内在因素,也有营养、环境、外源激素补充等外在因素。妊娠期平均为112-120天。发情期持续2-3天,雌性表现出的对交配的接受能力被称为站立发情。站立发情是雌性与性成熟公猪的唾液接触时刺激的一种反射反应。雄烯醇是公猪下颌唾液腺产生的一种能引发雌性反应的信息素。
图1 猪
图2猪免疫球蛋白
猪的免疫球蛋白在血清学上主要有IgM、IgG、IgA、IgE四大类,其中一半免疫球蛋白分子属于κ型,另一半属于λ型(Butler and Brown,1994),猪血清IgA分子主要为二聚体。
猪基因组中存在单拷贝的C α和C ɛ基因以及几个C γ基因。已鉴定出 5 个假定的 IgG 亚类,可分为两组。一组包含 IgG1 和 IgG3,另一组包含 IgG2a、IgG2b 和IgG4亚类(Kacskovics等人,1994 年)。IgG 亚类的重链之间存在高度序列相似性,铰链区也是如此。猪和人的 γ 和 λ 链之间存在显著的同源性,但猪和人的 κ 链之间的同源性不太明显(Lammers等人,1991 年)。
猪V H基因似乎属于一个不超过 20 个成员的家族。它们与人类V H III基因家族兔和鸡V H基因同源(Sun等人,1994 年)。猪基因组中只有一个J H基因。在猪、兔和牛基因组中均未发现δ 链的恒定基因(C δ )( Butler等人,1996 年)。基因转换被认为是猪V H基因库多样化的一种机制。
猪免疫实验流程:
(1)抗原的制备
抗原的数量取决于抗原的固有特性、抗原是否纯化或者是抗原混合物中的一种成分、所用的佐剂以及注射的途径和频率。
一般来说,需要微克到毫克数量的蛋白质抗原与佐剂结合才能在实验动物中引发高滴度血清反应,对于猪一般免疫剂量为250-1000μg。
a.根据抗体用途设计制备抗原,可以使用重组蛋白,合成肽。
b.尽可能保持抗原生物学活性。
(2)动物种类的选择
通常使用4-7月的猪。
(3)佐剂的选择和制备
弗氏完全佐剂 (FCA)、弗氏不完全佐剂 (FIA )。FCA用于首次免疫,常用于生产多克隆抗体。
(4)注射途径:
a.油性佐剂和粘稠凝胶佐剂抗原:皮下 (sc)、皮内 (id)
b.可溶性抗原或水性佐剂抗原:皮下 (sc)、皮内 (id)、肌肉内 (im)和静脉内 (iv)
(5)注射剂量:
a.油性佐剂和粘稠凝胶佐剂混合抗原:皮下 (sc)、皮内 (id)可以注射0.5ml;皮下 (sc)、皮内 (id)可以注射0.05ml。
b.可溶性抗原或水性佐剂混合抗原:皮下 (sc)可以注射0.5ml、皮内 (id)可以注射0.2-0.5ml、肌肉内 (im)可以注射0.5ml、一般腹膜内 (ip)不推荐注射,静脉内 (iv)可以注射10-20ml。
(6)注射部位数量:
使用抗原乳化剂时一般进行4-6个注射部位,最好后续在相同位点进行抗原/佐剂混合物注射
(7)加强免疫:
当首次免疫后,抗体滴度通常在3-4周达到峰值。使用乳化佐剂混合抗原也可以在第4周进行加强免疫,一般进行2-3次加强免疫
(8)抗体效价监测:
一般进行3-4次抗体效价检测,评估免疫效果,安全采血量100-300ml
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