实验介绍
克隆生成试验或集落形成试验是一种基于单细胞生长成集落能力的体外细胞存活试验。菌落定义为至少由50个细胞组成。该试验基本上是测试群体中的每个细胞进行“无限”分裂的能力。克隆生成试验是测定电离辐射治疗后细胞生殖死亡的首选方法，但也可用于确定其他细胞毒性药物的有效性。只有一小部分被播种的细胞保留了产生菌落的能力。治疗前或治疗后，将细胞按适当的稀释量播种，1-3周形成菌落。通过对克隆形成的数量和大小进行分析，能够反映出细胞的克隆形成能力，进而了解细胞的生物学特性，如细胞的增殖活性、干细胞特性等。
图1 细胞克隆形成实验流程图
实验方法
平板克隆形成实验：将细胞悬液接种在含有培养基的培养皿中，待细胞贴壁后，加入适量的培养基继续培养。在培养过程中，单个细胞不断分裂增殖，形成细胞集落。培养一定时间后，用结晶紫等染料对细胞集落进行染色，计数大于50个细胞的集落数量，计算克隆形成率，以评估细胞的克隆形成能力。
软琼脂克隆形成实验：适用于悬浮生长的细胞或具有锚定依赖性生长特性的细胞。首先在培养皿底部铺一层含琼脂的底层培养基，待其凝固后，将细胞悬液与含琼脂的上层培养基混合均匀，铺在底层培养基上。细胞在软琼脂中形成克隆，培养一段时间后，通过显微镜观察并计数克隆数量，分析细胞的克隆形成能力。
示例结果：
客户提供
1. 细胞及药物
2. 实验方案（处理条件及处理浓度）
结果交付
细胞克隆形成检测结果及实验报告。
实验影响因素
细胞密度：接种的细胞密度过高或过低都会影响克隆形成率。密度过高，细胞之间竞争营养和空间，可能导致克隆形成率降低；密度过低，细胞之间的相互作用减少，也不利于细胞的生长和克隆形成。
培养基成分：培养基中的营养成分、生长因子、血清等对细胞的克隆形成有重要影响。不同细胞类型对培养基成分的需求不同，需要根据细胞的特性选择合适的培养基。
培养条件：包括温度、湿度、二氧化碳浓度等。适宜的培养条件是细胞克隆形成的关键，如哺乳动物细胞一般在 37℃、5% 二氧化碳的培养箱中培养。
细胞本身的特性：不同细胞类型的克隆形成能力不同，即使是同一类型的细胞，在不同的生理状态下，其克隆形成能力也可能存在差异。例如，肿瘤细胞的克隆形成能力通常比正常细胞强。
