实验介绍
MTT染色检测由MosmannT.在1983年首次提出,是一种广泛应用于细胞生物学领域的实验方法。该方法最初用于快速检测细胞介导的免疫毒性,后来因其简便、灵敏等特点,被广泛应用于细胞活力、细胞增殖、细胞毒性以及药物筛选等方面的研究。实验原理是一种黄色的四唑盐,其化学名称为3-(4,5-二甲基噻唑 -2-2,5-二苯基四氮唑溴盐。活细胞内的线粒体脱氢酶能够将MTT还原成不溶性的蓝紫色甲臜(Formazan)颗粒,而死细胞则无法进行此反应。甲臜颗粒可被二甲基亚砜(DMSO)等有机溶剂溶解,形成的溶液在特定波长下具有吸光值,且吸光值与活细胞数量呈正相关。通过酶标仪测定吸光值,就能反映出细胞的活力、增殖或毒性情况。近几十年来应用MTT法作为测量细胞增殖/活力、药物细胞毒性和细胞线粒体/代谢活性的常用工具。
图1 MTT作用原理图
实验流程
图2 MTT实验流程图
数据分析:
细胞活力(%)=[(As-Ab)/(Ac-Ab)] ×100
抑制率(%)=[(Ac-As)/(Ac-Ab)] × 100
As =实验孔的吸光度(细胞、培养基、CCK8 和测试化合物孔的吸光度)。
Ab =空白孔吸光度(含有培养基和 CCK8 的孔的吸光度)。
Ac =对照孔吸光度(含有细胞、培养基和 CCK8 的孔的吸光度)。
示例图
客户提供
1. 细胞及药物
2. 实验方案(处理条件及处理浓度)
结果交付
MTT检测结果及实验报告。