串联亲和纯化(TAP)是一种通用的两步亲和纯化方案,用于分离TAP标记蛋白及相关蛋白。TAP技术与COIP技术筛选相互作用蛋白的原理相似,不同之处在于TAP技术在诱饵蛋白上打上两个纯化标签,利用标签对蛋白复合物进行两轮纯化(串联亲和纯化),使洗脱液中的非特异性蛋白含量降低到较低水平。结合LC-MS/MS技术,对实验组和阴性对照组洗脱液中的蛋白类型进行鉴定,从而找到实验组中特有的蛋白,即可能的相互作用蛋白。
TAP-MS技术流程如下:
构建含有目的基因的载体
载体转染细胞并表达融合蛋白
细胞裂解提取总蛋白
纯化和洗脱
质谱分析和鉴定与诱饵蛋白相互作用的蛋白质
迈博睿生物为您提供以下服务:
Flag-HA融合诱饵蛋白真核表达载体或慢病毒载体的构建
瞬时载体转染靶细胞或包装慢病毒感染靶细胞
TAP纯化相互作用蛋白,减少非特异性结合蛋白的数量。我们提供的服务包括但不限于蛋白质分子量和等电点测定、蛋白质亚基分析、特异性蛋白检测等。
通过质谱技术鉴定相互作用的蛋白质,并进行大规模蛋白质组学分析。
迈博睿生物提供的TAP-MS服务基于两步纯化体系,显著降低非特异性蛋白的结合率,同时复合物相对稳定,结果准确可靠。
迈博睿生物拥有经验丰富的团队,提供各种TAP/MS服务。请联系我们,了解具体的项目实施内容和时间。迈博睿生物将是您值得信赖的合作伙伴。