介绍
反转录,也称为逆转录,是指以RNA为模板合成DNA的分子生物学过程。这个过程与中心法则(DNA → RNA → 蛋白质)中传统的“转录”(DNA → RNA)方向相反,因此得名。催化这一过程的酶称为反转录酶,最初是在一些RNA病毒(即逆转录病毒,如HIV)中发现的。
为什么需要反转录?RNA,特别是mRNA,是基因表达的“中间指令”,但它本身不稳定且难以直接进行很多操作和分析。而DNA则相对稳定,并且我们有成熟、强大的技术来对DNA进行扩增、测序和操作(如PCR、克隆等)。因此,反转录的核心目的是:将不稳定的RNA信息转换为稳定的、可操作的DNA拷贝。

实验流程
1. 变性;
2. 退火;
3. 延伸 ;
注意事项
产物可以立即用于PCR反应,或者短期在4℃保存,或者在-20℃保存少于半年。长期存放建议分装后在-80℃保存。cDNA应避免反复冻融。



