体外蛋白质表达是利用从细胞中提取的生物分子的翻译机制，在溶液中生产重组蛋白。由于蛋白质合成发生在细胞裂解物中，而非培养细胞中，因此该方法也称为无细胞蛋白质表达。迈博睿生物公司开发了多种利用细胞提取物的蛋白质表达系统，例如大肠杆菌无细胞表达系统、小麦胚芽无细胞表达系统、兔网织红细胞裂解物无细胞表达系统以及烟草无细胞表达系统。
迈博睿生物提供多种大肠杆菌无细胞表达系统，最常用的是大肠杆菌S30提取物表达系统。大肠杆菌S30提取物系统是利用omp T胞内蛋白酶和lon蛋白酶活性突变株大肠杆菌B制备而成，并通过添加氨基酸、T7 RNA聚合酶和能量物质实现目标蛋白的表达。
大肠杆菌无细胞表达系统实验方案：
- 配制大肠杆菌B菌液，收集对数生长期的菌体；
- 大肠杆菌细胞破碎（超声波、玻璃珠研磨、低温高压等），配制大肠杆菌S30提取体系，加入氨基酸、T7 RNA聚合酶、能量物质，形成反应体系；
- 加入质粒DNA或PCR产物，在RNA聚合酶作用下体外合成mRNA，孵育检测；
- 利用细胞提取物中的转录因子、各种合成蛋白质所需的酶以及补充的氨基酸、能量物质、tRNA等将mRNA翻译成蛋白质，并纯化目的蛋白；
- 翻译后释放出的mRNA利用无细胞系统再循环合成蛋白质，重复多次后mRNA就会失活。
大肠杆菌无细胞表达系统的优势：
- 提取物制备体系简单，成本低廉；
- 方便、快速表达目的蛋白，节省大量时间；
- 蛋白质合成速率高，可在同一体系中实现多种蛋白质的同时表达；
- 可直接用于蛋白质相互作用验证实验及折叠复杂蛋白质并完成快速蛋白质筛选。;
- 实现标记蛋白质的制备及特殊氨基酸的引入；
- 可以实现跨膜蛋白的表达，解决部分蛋白质以包涵体形式原核表达的问题；
- 可以直接干扰蛋白质的表达，实现对蛋白质表达的人工操控。
我们的科学家可以根据您感兴趣的蛋白质的特殊性质，根据您的需求优化特定蛋白质的密码子偏好，构建载体并在大肠杆菌无细胞蛋白表达系统中即时表达，并在RNA水平上检测特定蛋白质的转录并检测目标蛋白的表达。
迈博睿生物的无细胞表达平台可以为您提供全面的技术服务，专注于目标蛋白的特殊性质，专业解决蛋白表达相关难题，例如蛋白产量低、特殊蛋白（如膜蛋白、毒性蛋白等）的表达、蛋白复合物的制备、多种不同蛋白的平行合成等。我们始终把您的需求放在第一位，如果您对结果有任何疑问，我们都可以协助您验证。迈博睿生物是您理想的合作伙伴。如果您对我们的服务感兴趣，欢迎随时联系我们了解更多信息。
