邻近依赖性生物素识别 (BioID)

背景

介绍

在快速发展的蛋白质相互作用研究领域，迈博睿生物提供尖端的邻近依赖性生物素鉴定 (BioID) 服务，以揭示复杂的细胞网络和动态分子相互作用。利用先进的 BirA* 酶系统和简化的工作流程，我们使研究人员能够高特异性地绘制蛋白质相互作用组图，即使在具有挑战性的生物模型中也是如此。我们的专业知识涵盖从靶标验证到通路机制研究等各种应用，确保为药物发现和功能基因组学提供切实可行的见解。

BioID的技术工作流程

• 第一阶段：融合蛋白构建

BioID 首先通过基因工程技术将一种混杂的生物素连接酶（BirA*，大肠杆菌BirA的 R118G 突变体）与目标蛋白融合。这种融合确保 BirA* 定位到目标蛋白的原生细胞区域。

• 第 2 阶段：邻近生物素化

在活细胞中，BirA* 利用 ATP 和外源生物素生成活性生物素-5′-AMP，该活性生物素-5′-AMP 可标记半径约 10-20 纳米范围内蛋白质上的赖氨酸残基。这种短寿命中间体确保了空间特异性。

• 第三阶段：蛋白质捕获

细胞裂解后，使用链霉亲和素包被的磁珠分离生物素化蛋白。剧烈洗涤可去除非特异性相互作用，从而富集靶标近端相互作用蛋白。

• 第四阶段：质谱分析

纯化的蛋白质经消化成肽段，经液相色谱串联质谱 (LC-MS/MS) 分析，并通过数据库匹配进行鉴定。统计过滤可区分真正的相互作用物与背景物质。

图2。基本协议图。（Le Sage等人，2016）

BioID 服务的优势

1)体内相互作用图谱：检测活细胞中的蛋白质相互作用，反映真实的生物学状态。
2)高灵敏度和特异性：以最少的假阳性/阴性率识别低丰度蛋白质。
3)跨物种多功能性：适用于多种生物体和细胞类型，包括哺乳动物细胞、植物和酵母。
4)全面支持：提供互补的验证服务（例如，IP 检测），以确认相互作用并提供可行的见解。

服务流程

样品提交要求

要激活BioID服务，客户必须提交以下材料：

含有目的基因的质粒

• 提供一个携带用于与 BirA* 标签融合的目的基因的质粒。
• 确认质粒序列已经验证（例如通过桑格测序），以确保不存在意外突变或序列错误。

细胞系信息

• 指定稳定融合蛋白表达的细胞系（例如，HEK293，HeLa，HepG2）。
• 对于定制或工程细胞系，提供详细的处理方案，包括培养条件、转染方法或选择标记（如果适用）。

附加试剂（可选）

如果后期分析需要专门的试剂（例如，用于蛋白质印迹的抗体）或检测工具（例如，用于成像的荧光探针），请提供这些材料或明确列出其规格（例如，产品目录编号、稀释比）。

注：如客户不能提供特定试剂，我们可以准备全套。

送货

• 项目报告：详细说明实验的背景、目标、方法、结果和结论的综合报告。
• 银染凝胶图像：银染色结果的视觉记录，以确认生物素化和蛋白质捕获。
• 质谱数据：用于蛋白质鉴定的原始 MS 数据文件和详细分析结果。
• PPI 网络图：基于 MS 结果的蛋白质-蛋白质相互作用的图形表示。
• 稳定细胞系验证：荧光显微镜和蛋白质印迹数据确认稳定细胞系中的目标蛋白表达。
• 实验方案：供参考和重复的分步方法和试剂详细信息。
• 补充分析文件：支持深入解释结果的附加表格和数据。

服务范围

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