绵羊(sheep)或家羊(Ovis aries)是一种驯化的反刍哺乳动物,通常作为牲畜饲养。与所有反刍动物一样,绵羊属于偶蹄目。
绵羊是相对较小的反刍动物,通常长有卷曲的毛发(称为羊毛),角常形成侧螺旋状。一些原始品种的绵羊保留了其野生近亲的一些特征,例如短尾巴。根据品种的不同,家羊可能根本没有角(即无角),或者两性都有角,或者只有雄性有角。大多数有角品种只有一对。
母羊通常重45-100公斤,公羊重45-160 公斤。母羊通常在 6个月大时达到性成熟,而公羊通常在 4-6 个月大时达到性成熟。绵羊的妊娠期约为5个月。
绵羊和绵羊关系密切:都属于羊亚科。然而,它们是不同的物种。绵羊和绵羊在外观上的差异包括绵羊的胡须和绵羊的上唇分开。绵羊的尾巴即使很短或被截断也会下垂,而绵羊的短尾巴则是向上的。此外,绵羊品种通常是自然无角的(公母都有,或者只有母羊有),而自然无角的绵羊很少见。这两个物种的雄性之间的区别在于,公绵羊在发情期会产生一种独特而强烈的气味,而公绵羊则不会。
图1 绵羊
绵羊有5种免疫球蛋白同种型,由5种重链类(IgM、IgG、IgA、IgD 和 IgE)组成。IgG 类进一步细分为 3 种亚型(IgG1、IgG2 和 IgG3);IgA 类又细分为 2种亚型。与其他物种一样,重链与2种轻链(lambda和kappa)结合。
绵羊产生的多克隆抗体曾被广泛用于治疗毒液中毒和地高辛中毒,至今,其治疗应用仍在不断扩大。Crotalidae Polyvalent Immune Fab是一种在绵羊身上产生的抗蛇毒抗体,由于其治疗效果更高而副作用更小,显示出比在马身上产生的类似抗蛇毒血清更高的临床效用。此外,两种地高辛特异性抗体 DigiBind和 DigiFab都是从绵羊抗血清中制备的。
图2 绵羊IgG1
图3 绵羊IgG2
在绵羊免疫球蛋白IgG 重链、轻链 kappa 和轻链 lambda 参考编号为:
IGHG:IMGT 登录号X69797、 X70983
IGKC:IMGT 登录号IMGT000010
IGLC:IMGT 登录号IMGT000041、 IMGT000034。
IGHG1: X69797
IGHG2: X70983
IgM: X59994
IgA: AF024645
IgE: M84356
IgD: AF41123
绵羊免疫实验流程:
(1)抗原的制备
抗原的数量取决于抗原的固有特性、抗原是否纯化或者是抗原混合物中的一种成分、所用的佐剂以及注射的途径和频率。
一般来说,需要微克到毫克数量的蛋白质抗原与佐剂结合才能在实验动物中引发高滴度血清反应,对于绵羊一般免疫剂量为250-5000μg。
a.根据抗体用途设计制备抗原,可以使用重组蛋白,合成肽。
b.尽可能保持抗原生物学活性。
(2)动物种类的选择
通常使用4-6月龄的绵羊。传统上,雌性动物用于生产多克隆抗体,或者阉割过的雄性绵羊也是常用的选择。
(3)佐剂的选择和制备
弗氏完全佐剂 (FCA)、弗氏不完全佐剂 (FIA )。FCA用于首次免疫,常用于生产多克隆抗体。
(4)注射途径:
a.油性佐剂和粘稠凝胶佐剂抗原:皮下 (sc)、皮内 (id)
b.可溶性抗原或水性佐剂抗原:皮下 (sc)、皮内 (id)、肌肉内 (im)和静脉内 (iv)
(5)注射剂量:
a.油性佐剂和粘稠凝胶佐剂混合抗原:皮下 (sc)、皮内 (id)可以注射0.5ml;皮下 (sc)、皮内 (id)可以注射0.05ml。
b.可溶性抗原或水性佐剂混合抗原:皮下 (sc)可以注射2ml、皮内 (id)可以注射0.05ml、肌肉内 (im)可以注射2ml、一般腹膜内 (ip)不推荐注射,静脉内 (iv)可以注射30ml。
(6)注射部位数量:
使用抗原乳化剂时一般进行4-6个注射部位,最好后续在相同位点进行抗原/佐剂混合物注射
(7)加强免疫:
当首次免疫后,抗体滴度通常在2-3周达到峰值。使用乳化佐剂混合抗原也可以在第4周进行加强免疫,一般进行2-3次加强免疫
(8)抗体效价监测:
一般进行3-4次抗体效价检测,评估免疫效果,安全采血量150-400ml
绵羊多克隆抗体的生产比传统实验动物更复杂、更昂贵,但可以大批量生产。
绵羊多抗优点:
a.与传统实验动物相比,使用相同数量的抗原可获得更大的体积400-600ml
b.高抗体亲和力
c.高灵敏度
d.适用于生产针对小抗原和大分子小表位的抗体
e.交叉反应更小。
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