牛(Bos taurus, cattle,)是大型驯养的牛科有蹄类 动物,被广泛饲养。它们是牛亚科的现代主要成员,也是牛属分布最广泛的物种。
牛是大型偶蹄动物,是一种有偶蹄的哺乳动物。像所有牛科动物一样,它们有角,但角不分枝,每年不会脱落。牛的颜色因品种而异,常见的颜色有黑色、白色和红棕色,一些品种有斑点或混合色。公牛比同品种的母牛大几百公斤。母牛重 600-800公斤,而公牛重 1,000-1,200公斤。牛的品种大小差异很,成年公牛肩高可达1.8米,体重可达1,280公斤,牛的自然寿命约为25-30年。
母牛的妊娠期约为9个月,出生时雌雄比例约为 52:48。
图1 牛
牛免疫球蛋白(Igs) 主要包括三大类:IgG、IgA和IgM及少量的IgE和IgD。
a. IgM约占牛血清和初乳中总 Ig 的 5-10%。它是免疫反应过程中产生的第一种抗体,在疾病早期阶段可有效中和病原体。IgM 水平升高可能是近期感染或接触抗原的征兆。
b. IgG是血清和初乳中的主要抗体类型。乳清中免疫球蛋白的总含量约为0.7g/L,而IgG占总量的80%。 IgG 以单体形式存在。它是对感染的延迟反应而产生的,可以在体内保留很长时间,这使其成为被动免疫最有用的抗体。检测出 IgG 通常表示先前感染或接种过疫苗。IgG 还能耐受胃消化。
c. IgA是主要的粘膜抗体,可防止蛋白水解。
d. IgE在对抗寄生虫的免疫反应中发挥作用。
e. IgD的功能尚不明确,但最近才在牛身上得到证实。
图2 不同牛重链类别的理化性质
图3牛抗体超长 CDR3
在大多数物种中,CDR H3形成简单的环结构,在人类中通常长8-16个氨基酸。与大多数脊椎动物的抗体明显不同的是,在牛中发现的约10%的抗体具有超长 CDR H3,长度从40到70个氨基酸不等。对于这些不寻常的超长CDR H3牛抗体,很可能只有CDR H3与抗原结合,而其他 CDR 仅起结构作用。
牛免疫实验流程:
(1)抗原的制备
抗原的数量取决于抗原的固有特性、抗原是否纯化或者是抗原混合物中的一种成分、所用的佐剂以及注射的途径和频率。
一般来说,需要微克到毫克数量的蛋白质抗原与佐剂结合才能在实验动物中引发高滴度血清反应,对于牛一般免疫剂量为500-5000μg。
a.根据抗体用途设计制备抗原,可以使用重组蛋白,合成肽。
b.尽可能保持抗原生物学活性。
(2)动物种类的选择
通常使用1.5-2年的牛。
(3)佐剂的选择和制备
弗氏完全佐剂 (FCA)、弗氏不完全佐剂 (FIA )。FCA用于首次免疫,常用于生产多克隆抗体。
(4)注射途径:
a.油性佐剂和粘稠凝胶佐剂抗原:皮下 (sc)、皮内 (id)
b.可溶性抗原或水性佐剂抗原:皮下 (sc)、皮内 (id)、肌肉内 (im)和静脉内 (iv)
(5)注射剂量:
a.油性佐剂和粘稠凝胶佐剂混合抗原:皮下 (sc)、皮内 (id)可以注射0.5ml;皮下 (sc)、皮内 (id)可以注射0.05ml。
b.可溶性抗原或水性佐剂混合抗原:皮下 (sc)可以注射2ml、皮内 (id)可以注射0.05ml、肌肉内 (im)可以注射2ml、一般腹膜内 (ip)不推荐注射,静脉内 (iv)可以注射30ml。
(6)注射部位数量:
使用抗原乳化剂时一般进行6-8个注射部位,最好后续在相同位点进行抗原/佐剂混合物注射
(7)加强免疫:
当首次免疫后,抗体滴度通常在2-3周达到峰值。使用乳化佐剂混合抗原也可以在第4周进行加强免疫,一般进行2-3次加强免疫
(8)抗体效价监测:
一般进行3-4次抗体效价检测,评估免疫效果,安全采血量500-7000ml
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