PD模型制备：α-Syn 接种小鼠及免疫组织化学

将 α-Syn 样本 (10 μg) 注射至纹状体（前后方向，0.2 mm；内侧-外侧方向，-2.0 mm；背腹方向，-2.6 mm）。接种 3 个月后，用异氟烷麻醉小鼠，断头处死。用 10% 福尔马林中性缓冲液（Wako）固定脑组织，并用 Leica VT1200S 切片机制成 50 μm 切片。

采用针对 Ser-129 位磷酸化的 α-syn 的多克隆抗体 1175（1:2000）进行免疫组织化学染色。

ThT染色：切片用80%乙醇中的0.1% ThT染色15分钟，然后用80%和70%乙醇各1分钟，再用蒸馏水清洗两次。

使用BZ-X710（Keyence）观察并记录α-Syn病理。

使用BZ-X分析仪（Keyence）对α-Syn病理进行量化，并以磷酸化α-Syn沉积物覆盖的面积占总面积的百分比表示。

为制备肌酰不溶性级分，将脑组织置于干冰上速冻，并储存于-80°C。

将超声处理的 α-syn 原纤维注射到小鼠脑内，3 个月后通过磷酸化 α-syn 的免疫组织化学方法检查病理变化。与接种未处理的 α-syn 原纤维相比，碎裂的 α-syn 原纤维（例如超声处理 180 秒的原纤维）引起了更广泛的种子依赖性磷酸化 α-syn 聚集和更大范围的增殖。

将 α-syn 样品 (10 μg) 注射到纹状体 ( Str ) 3 个月后观察到的小鼠脑中磷酸化 α-syn 病理的分布。使用 Ser( P )-129 抗体通过免疫组织化学评估磷酸化 α-syn 病理。显示了注射了 α-syn 原纤维的脑前囟 0.62 毫米水平的典型图像 (右图)和磷酸化α- syn病理示意图 (图像旁边的左图)。红点表示磷酸化α - syn 病理。比例尺= 100 μm。

在注射原纤维的小鼠脑中观察到了硫代黄素 T 阳性聚集体（图 7C ）。

在纹状体、杏仁核、黑质、躯体感觉皮层、扣带皮层和胼胝体中观察到了类似路易体和路易神经突的磷酸化 α-syn 沉积物。

超声处理 α-syn 原纤维对小鼠脑中磷酸化 α-syn 的积累有显著影响。至于 α-syn 积累的传播模式，超声处理 60 秒和 180 秒的样品之间几乎没有差异，而超声处理 15 秒的样品引起的磷酸化 syn 病理不如超声处理 180 秒的样品引起的磷酸化 syn 病理广泛。

碎片化程度更高的 α-syn 原纤维也更有能力引起小鼠脑中种子依赖性的 α-syn 聚集。可能 α-syn 原纤维的更广泛的碎片化使它们能够更有效地融入细胞，从而由于 α-syn 聚合加速而导致朊病毒样繁殖的播种活性增加。