抗体是一种由B细胞识别抗原后活化、增殖分化为浆细胞,并由浆细胞合成与分泌的、具有特殊氨基酸序列的,能够与相应的抗原发生特异性结合的免疫球蛋白分子。
杂交瘤法制备单克隆抗体技术具有划时代意义。此前以抗原免疫动物获得抗血清途径制备的抗体则称之为多克隆抗体。1975年英国科学家Milstein和法国科学家Kohler将产生抗体的B淋巴细胞同肿瘤细胞融合形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞具备亲本细胞的特性,既可产生抗体,又具有肿瘤细胞无限增殖的特性,从而持续分泌单克隆抗体。
单克隆抗体在体外大量制备,对于目标分子识别具有高度特异,生产批次均一性较好,相比多克隆抗体可以极大的降低交叉反应,同时在生物制药领域使用抗体治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病具有很好的应用场景,单克隆抗体靶向攻击致病源并且毒副生毒副作用小。
西安迈博睿生物(mabioway)拥有强大的抗体发现平台,我们提供定制单克隆抗体生产的全方位服务,包括抗原设计制备、动物免疫、杂交瘤开发、抗体发现、抗体功能筛选测定、抗体工程和抗体表达。全方位开展抗体发现及研究应用工作。
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表1 小鼠单抗制备服务详情
项目 | 实验流程 | 优势 | 实验周期 |
1.抗原制备(可选) | 1.抗原分析及设计; 2.重组蛋白制备; 3.多肽合成及偶联。 | 1.根据客户实验需求设计免疫原 2.蛋白3D结构显示及优势表位预测 3.相关领域10年以上表位分析经验 | 4-6周 |
2. 动物免疫 | 1.免疫5只小鼠,进行4-5次免疫; 2.采集5只小鼠血清,ELISA检测效价; 3.提供鉴定报告。 | 1.根据抗原特性进行免疫方案规划 2.多种免疫途径相结合 | 4-6周 |
3.细胞融合与筛选 | 1.细胞融合 2.初筛 3.克隆扩增/上清液收集 4.二次筛选 5.克隆选择和冷冻(50以上个阳性克隆) | 1.融合经验丰富 2.电融合、PEG融合可选择 3.根据抗体应用选择筛选方案 4.可交付多克隆细胞培养上清供客户验证 | 5-7周 |
4.细胞筛选和亚型鉴定 | 1.基于表位结合基团的所有细胞同种型 2.阳性克隆的生物活性评估 | 1.抗体同种型:IgA(α),IgD(δ),IgE(ε),IgG(γ)和IgM(μ) 2.抗体亚型鉴定:IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgM, IgA, κ, λ链 3.根据抗体应用需求,配合相应的验证实验 | 3-4周 |
5.抗体生产 | 1.小规模抗体生产 | 1.针对阳性克隆细胞株,可进行细胞培养上清液、腹水生产抗体,1-3mg 2.根据抗体亚型选择protein A/G纯化 3.可进行SDS-PAGE、分子筛(SE-HPLC)鉴定 | 2-4周 |
6.亚克隆、扩增和冷冻保存 | 1.亚克隆和筛选 2.阳性单克隆细胞冻存(每个克隆3-5管) | 1.-80/液氮冷冻保存 2.根据客户需求交付细胞株数量 | 2周 |
7.最终交付 | 1.每个亲本克隆 2 个亚克隆 2.每个亚克隆 2 个细胞系 4.纯化后抗体1-3mg/株,>95%(SDS-PAGE) 5.完整实验报告 | 1.可提供细胞株冷冻保存服务 | 1周 |
8.抗体配对(可选) | 1.根据客户检测平台进行抗体标记(Biotin、HRP、吖啶酯等) 2.若干株阳性单抗两两组合,进行夹心ELISA实验; 3.根据夹心ELISA实验结果挑选配对抗体; | 1.选择灵敏度高、特异性好的捕获抗体及检测抗体 2.可以优化配对检测性能 3. ELISA检测方法开发与验证 4.出具相关的检测报告提供给客户。 | 2-3周 |
9.功能验证(可选) | 1.可以根据客户对抗体的要求进行ELISA、WB、IHC、IF、FACS等实验 2.抗体标荧光素活体检测 | 1.多种平台验证抗体使用效果 2.验证抗体在活体动物中的效果 | 1-3周 |
10.抗体片段化(可选) | 固相胃蛋白酶(pepsin)制备Fab 固相木瓜蛋白酶(papain)制备F(ab)2 | 1.酶切效率高,工艺稳定 2.无酶残留 3.抗体片段回收率高 | 1周 |
11.杂交瘤细胞测序(可选) | 1.抗体的VH 和 VL、抗体全长 2.CDR 分析 3.可以提供克隆/表达载体 | 1. IgG、IgM、IgA 和 IgE 抗体可变区(VH 和 VL) 2.可做小量瞬时转染表达鉴定及活性检测 | 1-3周 |
12. 抗体人源化(可选) | 1. 同源建模分析重链(VH)和轻链(VL)的可变区,设计人源化变体(3个VHs和3个VLs)。 2. 构建和表达 9 种人源化抗体(3条重链和3条轻链的组合)和嵌合版本(啮齿动物可变区和人类恒定区)。 3. 评估人化抗体和嵌合抗体的表达水平,并通过直接 ELISA 测量抗原结合。 | 1.可根据客户需求,设计抗体人源化,可保证人源化后亲和力不降低。 | 4-8周 |
13. 抗体稳定细胞株构建(可选) | 1.密码子序列优化、克隆构建 2.多克隆细胞系制备 3.高表达稳转单克隆细胞系筛选 4.悬浮培养 | 1.小试生产50ml 2.可提供多克隆细胞系及单克隆细胞系 | 2-9周 |
服务特色
(1)免费分析抗原序列,利用专业的抗原设计软件设计抗原,结合文献,综合选择免疫原序列;
(2)专有免疫技术: 针对多肽、单个氨基酸位点、修饰性氨基酸、农药残留、小分子等具有一整套解决方案;
(3)一站式解决方案: 从免疫接种到杂交瘤生成和表征的简化策略;
(4)采用新一代免疫佐剂,仅需3-5周,抗体滴度可达(1:105-1:107);
(5)高通量筛选分析:优化免疫和高通量筛选,用于亲和力测量、表位分级、同种型等;
(6)综合功能分析:在抗体亲和力排序、亲和力测量、交叉反应和其他体外生物学分析方面拥有丰富的经验。
(7)抗体人源化平台,可保证鼠源抗体人源化后亲和力不降低;