无细胞表达系统在蛋白质生产中应用广泛。一些难以在活细胞中表达和纯化的蛋白质,例如膜蛋白、GPCR和离子通道蛋白,通常可在无细胞表达系统中生产。除了大肠杆菌和麦胚无细胞表达系统外,迈博睿生物还开发了一种利用烟草细胞裂解液的高产无细胞蛋白表达系统。烟草无细胞蛋白表达系统主要用于生产抗体、抗原、酶和膜蛋白。由于其为无动物实验系统,因此从烟草无细胞系统表达和纯化的蛋白质更安全,更适合动物体内实验。
无细胞蛋白表达系统(CFS)(结合转录和翻译系统):
- 亚克隆:克隆目标基因(PCR产物或质粒);
- 转录反应-1:构建含有T7或SP6强启动子、含GAA(翻译增强子)的烟草花叶病毒5'前导序列、荧光蛋白和多克隆位点(MCS)的表达载体。将目的基因插入表达载体,与转录混合物(DNA模板、SP&RNA聚合酶、NTP Mix、Transcription Buffer和RNase抑制剂)相互作用后进行体外转录。
- 转录反应-2:以获得的mRNA为模板,在Translation Buffer(含有20种氨基酸、ATP和GTP)中进行翻译。不与仪器联用时,还有三种翻译方法:双层反应法、重复批次法和滤流法。其中,应用最为广泛的是双层反应法。
- 产品分析:我们可以分析荧光信号、荧光信号的数量和荧光素酶活性。
烟草无细胞蛋白表达因其自身优势而闻名。
- 与其他CFS相比,表达水平更高;
- 周期更短,24小时内即可得到目标蛋白;
- 具有植物翻译后修饰的功能。
- 更高纯度的回收蛋白质(带标签或不带标签),用于一些表达量较低的蛋白质和结构复杂的膜蛋白。
- 该蛋白可直接用于动物实验,无动物来源。
我们的科学家可以根据您的需求优化特定蛋白质的密码子偏好,构建载体并在烟草无细胞蛋白表达系统中进行瞬时表达,在RNA水平上检测特定蛋白质的转录,并检测目标蛋白质的表达。我们始终将您的需求放在首位,如果您对结果有任何疑问,我们可以帮助您验证。Profacgen是您理想的合作伙伴,如果您对我们的服务感兴趣,请随时联系我们了解更多信息。