RIP-RNA免疫沉淀

实验介绍

RNA免疫沉淀（RIP）是研究体内单个蛋白质与RNA分子物理关联的一种有效方法。该方法是基于使用针对靶标蛋白质的特异性抗体来富集RNA结合蛋白（RBP）和靶RNA复合物。任何与该蛋白复合物相关的RNA也将被分离出来，并可以通过基于聚合酶链反应的方法、杂交或测序进一步分析。进而明确揭示RNA与蛋白质的相互作用关系，从而了解特定RNA的调控机制或参与的生物学过程。

图1 RNA免疫沉淀示意图

服务流程

实验流程

1.    样本收集，裂解细胞核

2.    裂解液分组（input，IgG及IP组）

3.    RNA免疫沉淀，

磁珠与抗体结合：抗体与已预处理Protein A/G的Bead进行结合；捕获抗原：低温孵育结合“蛋白-RNA复合物”。

4.    洗掉未结合的蛋白

5.    纯化与免疫沉淀的 RBP 结合的 RNA纯化与免疫沉淀RBP

6.    逆转录RNA到cDNA和分析qPCR或测序；WB检测靶蛋白。

服务内容

结果示例图

RIP-qPCR示意图：

结果解析：该实验通过RIP实验验证细胞中蛋白UHRF1与基因METTL3相互作用。将UHRF1作为诱饵蛋白，使用对应抗体进行免疫沉淀，qPCR检测结果显示样本中UHRF1和METTL3有相互作用，且干扰METTL3后，相互作用增强。

RIP-seq示意图：

Zhang, H. et al.  Nat Commun 12, 5416 (2021).

技术交流

西安迈博睿生物（Mabioway）在RNA免疫沉淀领域研究多年，我们拥有专业的实验技术人员、完善的抗体实验设备、熟练的实验技术，可以为客户提供RNA免疫沉淀实验技术服务。如您对染色质免疫共沉淀实验感兴趣或者需要技术支持，请您与我们联系，根据需求提供方案和报价，我们免费提供项目咨询及评估。