N6-甲基腺苷，又称m6A，是广泛存在于mRNA上的一种碱基修饰行为。mRNA内部的修饰作用用于维持mRNA的稳定性。目前检测m6A的技术方法包括高通量测序、比色法和液质联用（LC-MS）技术。其中，液质联用（LC-MS/MS）和比色法可以检测mRNA的整体m6A水平，而MeRIP-seq和miCLIP-seq（m6A单核苷酸分辨率交联免疫沉淀结合高通量测序）是高通量测序方法。
miCLIP-seq是利用m6A抗体富集m6A修饰，配合紫外交联技术在全基因组中识别单碱基水平的m6A修饰。
miCLIP-seq的流程：
- 将富集的 mRNA 片段化。
- 使用带有 m6A 抗体的免疫磁珠与 m6A mRNA 片段结合。
- 采用紫外交联进行免疫沉淀后，在mRNA片段的3’端连接一个接头序列，在5’端添加P32放射性标记，然后转膜。
- 切开膜并按放射性标记回收后，进行逆转录、纯化回收mRNA片段。
- 将逆转录组的 cDNA 环化。
- 将环化的cDNA进行多重线性化，然后构建测序文库，供计算机测序。
图 1 miCLIP 协议
与其他m6A检测方法相比，miCLIP的特点如下：
- 可以准确定位m6A及m6A修饰，无需核苷酸预处理，节省了实验步骤。
- 根据特征突变，可以准确预测修改。
- 实验结果无偏移，识别不受峰形影响。
- 可以实现单碱基分辨率。
m6A作为一种非常重要的RNA表观遗传修饰，其如何与DNA和组蛋白表观遗传协同调控基因表达还有待进一步探索。miCLIP是一种高灵敏度的工具，可能广泛应用于RNA上发生的其他表观遗传修饰。
miCLIP-seq 服务的工作流程：
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